Устройства для приготовления питательных сред, условия и техника культивирования

Выращивание микроорганизмов на питательных средах называют культивированием(от лат. cultus — выращивание), а развившиеся в результате микроорганизмы — культурой. При развитии в жидкой среде культуры образуют суспензию, осадок или пленку, при развитии на плотной среде — колонии. Культура может быть чистой— содержать потомство клетки только одного вида и накопительной — состоять преимущественно из клеток одного вида микроорганизмов.

Внесение клеток микроорганизмов или какого-либо исследуемого материала (образца почвы, пробы воды) в стерильную питательную среду для получения чистой или накопительной культуры называют посевом.

Перенесение уже выращенных клеток из одной среды в другую (стерильную) называют пересевом,или пассированием(от лат. passus — чередование).

Обычно микроорганизмы выращивают при определенной постоянной температуре в термостатах (деревянных или металлических шкафах) или термостатных комнатах. В тех и других постоянная температура поддерживается с помощью терморегуляторов.

Культивирование при определенной температуре называется инкубацией,или инкубированием. Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. Для этого стеклянную посуду, не бывшую в употреблении, очищают от щелочи кипячением в растворе, содержащем K₂Cr₂O₇ (6%) и концентрированную H₂SO₄ (6%).

В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Жидкой средой для аэробных культур заполняют обычно ¹/₃ пробирки, для анаэробных — ²/₃. Если плотная среда в пробирках предназначена для последующего выращивания микроорганизмов, при подготовке к стерилизации ее наливают на ¹/₃ - ¹/₄ объема пробирок.

После стерилизации пробирки с еще не застывшей средой раскладывают на ровной поверхности стола в наклонном (под небольшим углом) положении для получения скошенной поверхности агара. Это так называемые косяки— косые или скошенные среды.

Плотная среда, застывшая при вертикальном положении пробирки, называется столбиком.Столбики питательной среды, занимающей ¹/₃ - ¹/₂ объема пробирки, используют для посева культуры уколомСтолбики питательной среды, занимающие ²/₃ объема пробирки, после стерилизации применяют для заливки стерильных чашек Петри, предназначенных для микробиологических посевов.

Пробирки со средами и культурами во время работы устанавливают в штативы; пробирки со средами, подготовленными к стерилизации, помешают в проволочные корзины или металлические ведра с отверстиями; пробирки с культурами при инкубации или хранении — в картонные коробки.

При культивировании микроорганизмов в колбах используют только жидкие питательные среды. Для аэробных микроорганизмов среду наливают тонким слоем (например, 30 мл в колбы 'Эрленмейера на 100 мл), для анаэробных микроорганизмов колбу заполняют на ²/₃ объема.

В чашках Петри микроорганизмы культивируют лишь на плотных средах. Высота этой посуды — около 1,5 см, диаметр — 8—10 см, причем диаметр верхней чашки (она служит крышкой) несколько больше диаметра нижней.

Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические иглы, петли и шпатели (рис. 2). Их изготовляют из платиновой проволоки, которую закрепляют в специальных металлических

держателях или впаивают в стеклянные палочки. Толщина игл и петель не должна превышать 0,5 мм, толщина шпателя может быть 1,5 мм и более.

При посевах и пересевах культур микроорганизмов из колоний, выросших на плотных средах, применяют иглы или шпатели. Последние используют и для взятия клеток микроорганизмов из колоний, врастающих в субстрат. Суспензии микроорганизмов берут петлей.

При приготовлении препаратов микроорганизмов предметные стекла удерживают на весу пинцетами Корнэ или специальными пинцетами-держателями. Сушить препараты целесообразно на верхнем ярусе сушильного металлического столика Коха (рис. 3). Промывать их удобно на приспособлениях-перекладинах или на так называемых препаратодержателях — параллельно расположенных стеклянных палочках, соединенных резиновыми трубками (длина палочек 20—30 см, трубок 15—20 см). Палочки устанавливают над фарфоровыми чашками или ваннами.