Устройство вирусологической лаборатории

Этапы лабораторной диагностики вирусных болезней. Устройство вирусологической лаборатории.

1) Индикация (обнаружение) вируса в патматериале:

Экспресс-методы:

a) Обнаружение вирионов:

(1) Электронной микроскопией;

(2) Световой микроскопией (оспа);

b) Обнаружение вирусных АГ в серологических реакциях (РИФ, ИФА, РСК, РДП, РНГА);

c) Обнаружение телец-включений методами световой и люминесцентной микроскопии;

d) Обнаружение вирусных нуклеиновых кислот методами ПЦР, ДНК-зондов;

e) Обнаружение гемагглютининов в РГА;

f) Обнаружение инфекционной активности вируса в биопробе.

2) Изоляция (выделение) вируса из патматериала. Изоляцию проводят независимо от результатов первого этапа методом биологической пробы в трёх «слепых» пассажах. Пассаж – это заражение живой системы, с целью получения новой популяции вируса. «Слепой» пассаж – заражение без видимых признаков репродукции вируса. Через три пассажа в клетках живой системы происходит накопление вируса, что сопровождается появлением признаков репродукции, видимых на уровне макроорганизма. Например, при биопробе на животных: клинические признаки, гибель, патизменения; на куриных эмбрионах – гибель, патизменения, гемагглютинация; на культуре клеток – ЦПД, гемадсорбция, бляшки, РИФ и др. Такие зараженные живые системы определяют как положительная биопроба. Однако точно установить вид инфекционного агента еще нельзя. Поэтому от положительной биопробы отбирают патологический материал, который условно считают вторичным, т.е. отобранным из живой системы с признаками положительной биопробы. Из него готовят вируссодержащую суспензию или мазки-отпечатки (выделенный вирус).

3) Идентификация (определение вида) выделенного вируса в серологических реакциях или методом ПЦР-анализа. В редких случаях возможна идентификация по другим признакам, например по внутриклеточным включениям (тельца Бабеша-Негри для бешенства).

4) При необходимости – доказательство этиологической роли выделенного вируса. Для этого применяют серологические реакции, в которых в качестве антигена используют выделенный вирус и в качестве антител – парные пробы сыворотки крови в двукратных последовательных разведениях. Положительным результатом, доказывающим этиологическую роль выделенного вируса, является увеличение титра антител во второй пробе сыворотки крови по сравнению с первой в 4 и более раз.

5) Ретроспективная диагностика. С этой целью используют парные сыворотки крови, взятые на этапе выздоровления, которые исследуют в серологических реакциях со стандартным специфическим антигеном в соответствии с предварительным диагнозом на вирусную болезнь. Нарастание в 4 и более раз титра антител во второй пробе по сравнению с первой свидетельствует об активном инфекционном процессе, протекающем в организме животного в период взятия у него крови. При этом болезнь вызвана тем вирусом, к которому установлено повышение титра антител в парных сыворотках.

Устройство вирусологической лаборатории.

Для организации диагностической лаборатории используют изолированный отсек, состоящий не менее чем из 5-6 комнат.

Под лабораторию отводят светлое помещение. Комнаты для работы с вирусным материалом должны быть хорошо освещены и состоять из предбоксника и бокса, разделенных стеклянной перегородкой с дверьми. В боксах размещают только столы, стулья и принадлежности для работы. Поверхность столов покрывают нержавеющей сталью, пластиком или стеклом, а над рабочей поверхностью устанавливают бактерицидные лампы. У входа в бокс кладут резиновый губчатый дезковрик, пропитанный дезраствором. В предбокснике лежат стерильная одежда и оборудование, соответствующее назначению бокса. Лабораторию обеспечивают холодной и горячей водой и вентиляцией с подачей стерильного воздуха.

Для регистрации поступающего патматериала предназначена приемная,где размещают несколько столов, обитых оцинкованной жестью, и емкости с дезрастворами (3% хлорамина, натрия гидроксида или 5% фенола).

В комнате для предварительной обработки материала (вскрывочной) вскрывают трупы и отбирают материал для дальнейшего исследования.

Комнаты-боксы оборудуют в зависимости от назначения.

В автоклавной стерилизуют посуду, питательные среды, аппаратуру, питательные среды и обезвреживают инфекционный материал. Необходимо иметь два автоклава: для чистых материалов и для инфицированных.

Моечная предназначена для мытья посуды, аппаратуры и приборов.

Виварий должен иметь карантинное отделение, комнаты для здоровых и экспериментальных животных и подсобные помещения.

Для вирусологической лаборатории любого типа обязательной частью лаборатории является настольный бокс или лучше бокс с ламинарной подачей воздуха.