Выделение меконовой кислоты из биологического материала

Из биологического материала меконовую кислоту изолируют подкисленным спиртом. Для подкисления биологического материала лучше применять соляную кислоту, а не слабые органические кислоты.

Исследуемый биологический материал настаивают с этиловым спиртом, подкисленным соляной кислотой. Вытяжку сливают с твердых частиц биологического материала и фильтруют, а затем фильтрат на водяной бане выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в воде и фильтруют. Полученный фильтрат нагревают до кипения и взбалтывают с избытком оксида магния. Раствор, содержащий меконат магния, еще горячим фильтруют и упаривают до небольшого объема, а затем подкисляют разбавленной соляной кислотой. В этом растворе определяют наличие меконовой кислоты.

Обнаружение меконовой кислоты

Для обнаружения меконовой кислоты применяют реакцию с хлоридом железа (III) и метод УФ-спектроскопии.

Реакция с хлоридом железа (III).К 1—2 мл указанного выше раствора прибавляют 2—3 капли 1 %-го раствора хлорида железа (III). Появление кроваво-красной окраски указывает на наличие меконовой кислоты в растворе. Эта окраска не должна исчезать при нагревании.

Обнаружение меконовой кислоты по УФ-спектрам.Меконовая кислота в водном растворе имеет максимумы поглощения при 210, 284 и 303 нм.

Описанные выше способы выделения меконовой кислоты из биологического материала и обнаружения ее в вытяжках также пригодны для исследования остатков пищи, мочи, рвотных масс и других объектов на наличие указанной кислоты.

МЕКОНИН

Меконин содержится в опии, получаемом из снотворного мака и в желтокорне канадском. Меконин представляет собой белое кристаллическое вещество (т. пл. 102 °С). Он хорошо растворяется в щелочах с образованием солей мекониновой кислоты. Эти соли не стойкие и сразу же подвергаются гидролизу. При действии слабых восстановителей на наркотин и гидрастин образуется меконин. Его также можно получить из опианобой кислоты, которая образуется при нагревании наркотина с водой. От прибавления восстановителей к опиановой кислоте образуется меконин.

Меконин трудно растворяется в холодной воде (1 : 700), лучше—в кипящей воде (1 : 22), хорошо — в этиловом спирте, диэтиловом эфире, бензоле и хлороформе.

Меконин экстрагируется органическими растворителями из кислых растворов.

Меконин не имеет токсикологического значения, но обнаружение его в трупном материале указывает на отравление опием.

Выделение меконина из биологического материала.Измельченный биологический материал настаивают с этиловым спиртом, подкисленным серной кислотой. Полученную вытяжку сливают с твердых частиц объекта, фильтруют и упаривают до небольшого объема. Затем эту жидкость взбалтывают с бензолом. Бензольную вытяжку выпаривают досуха. Сухой остаток исследуют на наличие меконина.

Обнаружение меконина.От прибавления нескольких капель концентрированной серной кислоты к полученному выше сухому остатку появляется зеленая окраска, которая в течение двух суток переходит в красную. При слабом нагревании раствора, имеющего зеленую окраску, появляется изумрудно-зеленая окраска, переходящая в фиолетовую, а затем в красную.

НОКСИРОН

Ноксирон (глютетимид, дориден, элродорм) —З-этил-3-фенилглутаримид— белый кристаллический порошок. Под влиянием щелочей происходит расщепление пиперидинового цикла в ноксироне:

По данным Е. Кларка, под влиянием 0,5 н. раствора щелочи уже через 90 с начинается размыкание пиперидинового цикла в молекулах ноксирона.

Ноксирон нерастворим в воде, растворяется в хлороформе (1:1), этиловом спирте (1:5), диэтиловом эфире (1:12) и в других органических растворителях.

Ноксирон экстрагируется органическими растворителями из кислых водных растворов.

Применение. Действие на организм.Ноксирон применяется как успокаивающее и снотворное средство. Снотворное действие ноксирона слабее, чем действие барбитуратов. При длительном применении ноксирона к нему развивается привыкание.

Метаболизм. Ноксирон быстро всасывается из пищевого канала и относительно быстро выделяется из организма. Он является рацематом. Каждая энантиоморфная форма этого препарата метаболизируется неодинаково. Правовращающая форма ноксирона метаболизируется с образованием α-этил-α-фенил-α-оксиглютетимида, часть которого превращается в α-этил-α-фенилглютаконимид. Левовращающая форма ноксирона превращается в α-(1-оксиэтил)-α-фенилглутаримид. Затем некоторая часть этого метаболита превращается в α-фенилглютаримид. Часть указанных выше метаболитов выделяется с мочой в виде глюкуронидов.

Выделение ноксирона из биологического материала. Ноксирон из биологического материала изолируют водой, подкисленной щавелевой кислотой. Для обеспечения полноты изолирования ноксирона из биологического материала последний 3 раза по 1 ч настаивают с водой (по 150, 75 и 75 мл), подкисленной щавелевой кислотой (рН=1...2). Полученные при этом кислые вытяжки соединяют и взбалтывают с хлороформом, в который переходит ноксирон и некоторые примеси. Для очистки ноксирона от примесей хлороформные вытяжки взбалтывают с 0,5 н. раствором соляной кислоты. При этом ноксирон остается в хлороформном слое, который затем используют для идентификации и количественного определения этого препарата.

При исследовании мочи и крови на наличие ноксирона его экстрагируют хлороформом. С этой целью к моче или крови прибавляют равный объем хлороформа и взбалтывают в течение 15 мин. Хлороформную вытяжку отделяют от мочи или крови и взбалтывают с 0,5 н. раствором соляной кислоты. Очищенные таким образом хлороформные вытяжки исследуют на наличие ноксирона.

Обнаружение ноксирона

Реакция с изопропиламином и солями кобальта. Эту реакцию выполняют так, как указано при описании способов идентификации барбитуратов (см. гл. V, § 12).

Реакция с хлорциикиодом. От прибавления капли раствора хлорцинкиода к ноксирону через 2—5 мин образуются темно-бурого цвета кристаллы, имеющие форму призм или сростков из них.

Приготовление раствора хлорцинкиода (см. Приложение 1, реактив 60).

Перекристаллизация ноксироиа из серной кислоты. К остатку ноксирона, полученному после испарения хлороформной вытяжки, прибавляют каплю концентрированной серной кислоты. После растворения остатка в кислоте прибавляют каплю воды. При наличии ноксирона через 10—30 мин появляются сростки бесцветных призматических кристаллов.

Обнаружение ноксирона методом хроматографии в тонком слое силикагеля. На пластинку, покрытую тонким слоем силика-геля КСК, наносят каплю исследуемого раствора и каплю раствора «свидетеля». Пятна нанесенных растворов подсушивают на воздухе, а затем пластинку вносят в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей (смесь ацетона и хлороформа в соотношении 1:9). После продвижения растворителей на пластинке на 10 см выше линии старта пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают 1 %-м раствором нитрата ртути (I). При наличии ноксирона в исследуемом растворе на белом фоне пластинки появляются серо-черного цвета пятна (Rf = 0,60...0,65). Этот метод позволяет обнаружить 10 мкг ноксирона в пробе.

Приготовление хроматографических пластинок(см. Приложение 2, способ 4).

Обнаружение ноксирона по УФ- и ИК-спектрам.Раствор ноксирона в этиловом спирте имеет максимумы поглощения при 251, 257 и 263 нм. В щелочном растворе ноксирон имеет максимум при 235 нм и минимум при 223—225 нм. Как указывает Е. Г. Кларк, измерение максимумов поглощения ноксирона в щелочных растворах должно производиться не позднее 90 с после прибавления щелочи, так как при более длительном соприкосновении ноксирона со щелочью светопоглощение раствора изменяется в результате разрушения пиперидинового цикла в молекулах этого препарата. В ИК-области спектра ноксирон (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1686, 1710 и 1200 см- ¹.

Для обнаружения ноксирона может быть использована реакция образования гидроксамата железа (Е. Д. Зинакова).

Предварительная проба на наличие ноксирона в моче.50 мл мочи вносят в делительную воронку и подкисляют 0,1 н. раствором соляной кислоты до рН = 4...5. Подкисленную мочу дважды взбалтывают с новыми порциями диэтилового эфира (по 20 мл). Эфирные вытяжки соединяют и взбалтывают с 4 мл воды, а затем отделяют водную фазу от эфирной вытяжки. Эту вытяжку выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл хлороформа. К части хлороформного раствора прибавляют 2 капли свежеприготовленного 1 %-го раствора ацетата кобальта в метиловом спирте и 2 капли свежеприготовленного 1 %-го раствора гидроксида лития в метиловом спирте. Появление синей окраски, переходящей в снне-зеленую, указывает на наличие ноксирона в моче.

САЛИЦИЛОВАЯ КИСЛОТА

Салициловая ( о -оксибензойная) кислота представляет собой белые игольчатые кристаллы или легкий кристаллический порошок без запаха. Эта кислота перегоняется с водяным паром, при осторожном нагревании она возгоняется. Растворя ется в диэтиловом эфире (1 : 3), этиловом спирте (1 : 4), хлороформе (1 : 55), слабо растворяется в воде (1 : 550), легче — в кипящей воде (1 : 15).

Салициловая кислота экстрагируется органическими растворителями из кислых водных растворов.

Применение. Действие на организм. Салициловая кислота применяется в медицине для лечения кожных и других заболеваний. При более высокой концентрации (10—20%) салициловая кислота проявляет кератолитическое действие (разрыхляет и отторгает эпидермис). На этом свойстве салициловой кислоты основано применение ее в составе различных противомозольных средств. В малых концентрациях (1—2 %) салициловая кислота проявляет кератопластическое действие (способствует разрастанию эпидермиса). Салициловая кислота подавляет секрецию потовых желез. Поэтому она применяется в виде растворов и присыпок при повышенной потливости. Дезинфицирующее действие салициловой кислоты (в пастах, мазях) используется для лечения инфекционных заболеваний кожи.

Салициловая кислота применяется как консервант при изготовлении вин, овощных консервов, варенья, соков и т. д. Следует отметить, что на заводах и фабриках для консервирования салициловая кислота не применяется. Салициловая кислота в незначительных количествах содержится в вишне, малине, землянике и других ягодах как составная часть.

При поступлении салициловой кислоты внутрь наблюдается раздражение слизистой оболочки желудка, появляются боль в надчревной области, тошнота, а иногда и рвота. Поэтому салициловая кислота не применяется внутрь. Для этой цели применяются соли салициловой кислоты (салицилаты) и ее производные.

Метаболизм. Салициловая кислота частично выделяется из организма с мочой в несвязанном виде и в виде конъюгатов с глицином и с глюкуроновой кислотой. Метаболитами салициловой кислоты являются о-гидроксибензоилглюкуронид и о-карбоксифенилглюкуронид. Часть салициловой кислоты, поступившей в организм, метаболизируется путем гидроксилирования. При этом в качестве метаболитов образуются 2,3-дигидроксибензойная кислота, 2,5-дигидроксибензойная кислота и 2,3,5-тригидроксибензойная кислота. Эти метаболиты выделяются из организма с мочой.

Выделение салициловой кислоты из биологического материала. Для выделения салициловой кислоты из биологического материала применяют методы, основанные на изолировании ядовитых веществ водой, подкисленной серной или щавелевой кислотой.

Для выделения салициловой кислоты из консервов, варенья и других пищевых продуктов их настаивают с 1 %-м раствором карбоната натрия. При этом салициловая кислота превращается в растворимый салицилат натрия. Водную вытяжку отфильтровывают, подкисляют раствором серной кислоты. Образовавшуюся при этом салициловую кислоту экстрагируют органическими растворителями.