Изучение влияния концентрации модельного соединения на жизнеспособность продуцента

Для проведения эксперимента были выбраны следующие исходные концентрации красителя Methyl Orange: 0,01 мг/мл, 0,05 мг/мл, 0,1 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1 мг/мл.

Процесс осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750 мл в течение суток на круговой качалке при температуре 32ºС. В колбы вносили 10 мл посевного материала III пассажа (3 суток роста), 140 мл 0,1М раствора цитрат-фосфатного буфера (рН 4,5) и соответствующее количество красителя Methyl Orange для достижения заданных концентраций. Общий объем раствора в каждой колбе составил 150 мл. В контрольные колбы вносили посевной материал и 0,1М раствор цитрат-фосфатного буфера в заданных соотношениях.

Через сутки после начала эксперимента из каждой колбы был сделан высев на чашки Петри с агаризованным суслом в количестве 1 мл раствора, содержащего биомассу гриба. Осмотр чашек Петри производили через трое суток после высева. Результаты проведения эксперимента представлены на рисунке 12.

а) б)

в) г)

д) е)

Рисунок 12. Высев на чашки Петри из колб, содержащих раствор с концентрацией красителя: а) контроль, б) 0,01 мг/мл, в) 0,05 мг/мл, г) 0,1 мг/мл, д) 0,5 мг/мл, е) 1 мг/мл.

В результате проведения эксперимента было установлено, что предельная концентрация модельного соединения для данного штамма находится в диапазоне 0,1 – 0,5 мг/мл. Для уточнения предельного значения концентрации модельного соединения был проведен дополнительный эксперимент.

Для проведения эксперимента были выбраны следующие исходные концентрации модельного соединения: 0,15 мг/мл, 0,2 мг/мл, 0,25 мг/мл, 0,3 мг/мл, 0,35 мг/мл, 0,4 мг/мл и 0,45 мг/мл.

Процесс осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750 мл в течение суток на круговой качалке при температуре 32ºС. В колбы вносили 10 мл посевного материала III пассажа (3 суток роста), 140 мл 0,1М раствора цитрат-фосфатного буфера (рН 4,5) и соответствующее количество красителя Methyl Orange для достижения заданных концентраций. Общий объем раствора в каждой колбе составил 150 мл. В контрольные колбы вносили посевной материал и 0,1М раствор цитрат-фосфатного буфера в заданных соотношениях.

Через сутки после начала эксперимента из каждой колбы был сделан высев на чашки Петри с агаризованным суслом в количестве 1 мл раствора, содержащего биомассу гриба. Осмотр чашек Петри производили через трое суток после высева. Результаты проведения эксперимента представлены на рисунок 13.

а) б)

в) г)

д) е)

ж) з)

Рисунок 13. Высев на чашки Петри из колб, содержащих раствор с концентрацией красителя: а) 0,15 мг/мл, б) 0,2 мг/мл, в) 0,25 мг/мл, г) 0,3 мг/мл, д) 0,35 мг/мл, е) 0,4 мг/мл, ж) 0,45 мг/мл з) контроль

При концентрации красителя 0,15 мг/мл и 0,2 мг/мл площадь обрастания мицелием гриба на третьи сутки роста составила около 80%, при концентрации модельного соединения 0,25 мг/мл – 50%, при 0,3 мг/мл – 45%, при 0,35 мг/мл – 25%. При концентрации красителя 0,4 мг/мл рост культуры на поверхности агаризованного сусла отмечен не был. При концентрации 0,45мг/мл площадь обрастания мицелием гриба на третьи сутки роста составила около 20%.

Таким образом, в результате проведения эксперимента установлено, что концентрация красителя 0,5 мг/мл и выше является летальной для клеток продуцента. Жизнеспособного мицелия в этом случае через 1 сутки экспозиции не остается. При концентрации менее 0,1 мг/мл жизнеспособность клеток продуцента сохраняется полностью. В диапазоне концентраций 0,15-0,45 мг/мл происходит постепенное снижение жизнеспособности мицелия.

На основании полученных результатов была выбрана рабочая концентрация красителя, которая составила 0,15 мг/мл. Данное значение концентрации модельного соединения соответствует значениям, приведенным в литературных источниках [Rodríguez Couto S. et al., 2004].