Характеристики УФ-спектров, используемые при идентификации некоторых лекарственных веществ в фармакопейном анализе

Лекарственное вещество	Концентрация и растворитель	Показатель, используемый для идентификации
Эпинефрин (Адреналин)   Хлорамфеникол (Левомицетин)     Токоферол     Тетрациклин     Феноксиметил-пенициллин     Натрия пара–аминосалицилат     Цианокобаламин	0,005 % в 0,01 моль/л HCl   0,002 % в H2O   0,01% в абсолютном спирте     0,001 % в 0,2 моль/л NaOH     0,02% в 0,4 % растворе NaHCO3   0,001 % водный раствор     0,002% водный раствор	λmax 278 нм; = 78-82 λmax 278 нм; = 290-305   λmax 285 нм; = 42-47   λmax 380 нм; = 290-305           λmax 278, 361 и 548 нм

3.4.2.2. При хранении некоторые препараты могут частично окисляться с появлением окраски, интенсивность которой контролируется величиной оптической плотности приготовленного раствора при определенной длине волны.

Например, при определении цветности 16 % водного раствора метамизола (анальгина) измеряют его оптическую плотность при 400 нм, которая не должна быть более 0,10 (НД, Китай). При определении цветности 10 % водного раствора ампициллина натриевой соли измеряют его оптическую плотность при длине волны 430 ± 1 нм; она не должна превышать 0,15 (ФС, Россия).

Определение количественного содержания

Лекарственных веществ

При количественном определении в УФ-области спектра точную массу или объем анализируемого образца (субстанция, таблетки, инъекционные растворы и т.д.) растворяют в подходящем растворителе, при необходимости готовят соответствующее разведение и измеряют оптическую плотность приготовленного раствора при длине волны, указанной в НД, на приборе спектрофотометре. Концентрацию (или массовую долю в процентах) анализируемого вещества определяют одним из нижеприведенных способов.

3.4.3.1.Сравнение поглощения раствора испытуемого вещества с поглощением стандартного раствора

Готовят раствор стандартного образца анализируемого вещества с концентрацией, близкой к концентрации анализируемого вещества.

Стандартные образцы – это дополнительно очищенные вещества, которые используются как эталонные при проведении анализа физическими, физико-химическими и биологическими методами. Стандартные образцы подразделяются на государственные стандартные образцы (ГСО), рабочие стандартные образцы (РСО) и стандартные образцы веществ-свидетелей (СОВС).

ГСО выпускаются в соответствии со специальными требованиями. На них, как и на лекарственные вещества, имеются отдельные фармакопейные статьи. При расчете количественного содержания стандартный образец принимают за 100 %.

В качестве РСО используют образцы серийных лекарственных

веществ, соответствующих требованиям фармакопейных статей на эти вещества.

Стандартные образцы веществ-свидетелей используют для определения примесей или компонентного состава лекарственных средств. В качестве СОВС могут быть использованы ГСО, РСО, а также вещества, специально изготовленные и аттестованные в порядке, предусмотренном частной фармакопейной статьей.

Согласно основному закону светопоглощения, для одного и того же вещества отношения оптических плотностей к соответствующей концентрации равны между собой:

, отсюда

Указанный способ часто используется в практике фармацевтического анализа. Основным ограничением его является наличие стандартного образца.

Расчет количественного содержания индивидуального вещества в процентах (Х) в субстанциях проводят по формуле:

(3.8),

где A и A_ГСО - оптическая плотность растворов исследуемого и государственного стандартного образца соответственно;

С - концентрация раствора стандартного образца, г/мл;

а - точная масса лекарственного вещества, г;

5, 100, 100 - разведения, согласно НД, мл.

Более практичен вариант записи формулы (3.8), где указан способ приготовления раствора стандартного образца:

(3.9),

где 5, 10, 100, 100, 100, 100 – разведения, согласно НД, мл;

в – точная масса ГСО, г.

При анализе лекарственных форм формула (3.9) принимает следующий вид:

а) в таблетках, драже, суппозиториях

(3.10),

где A_РСО – оптическая плотность раствора рабочего стандартного образца;

а_1, в – точная масса лекарственной формы и рабочего стандартного образца соответственно, г;

М – средняя масса таблеток, драже, суппозиторий, г;

б) в жидких лекарственных формах

(3.11),

где V₁ – объем анализируемого раствора, взятый для анализа, мл;

V – объем лекарственной формы по прописи, мл;

2, 10, 100, 100, 100, 100 - разведения, согласно НД, мл.

Предлагаемый способ реализуется лишь при наличии ГСО или РСО.

В противном случае определение проводят по п. 3.4.3.2.

3.4.3.2.Определение концентрации по величинам удельного или молярного коэффициентов поглощения

Расчет концентрации лекарственных веществ в субстанциях, твердых и жидких лекарственных формах проводят по формулам, аналогичным (3.9), (3.10), (3.11).

При этом в них заменены на величины или e. При количественном анализе, как правило, используется величина .

В субстанциях

(3.12),

где 100 (в знаменателе) – пересчет концентрации растворов (г/мл в %).

В таблетках, суппозиториях, драже

(3.13).

В жидких лекарственных формах

(3.14).

В фармацевтическом анализе достаточно часто используют значение удельного показателя поглощения определяемого вещества, например, при количественном анализе субстанций рутина, рибофлавина, феноксиметилпенициллина, капсул троксевазина, настойки пустырника, ингаляционного аэрозоля «Астмопент» и др.

Для определения значений удельных показателей поглощения анализируемых веществ используются данные градуировочных графиков.

Готовят серию (5-10) растворов стандартного образца (ГСО или РСО) исследуемого вещества с постепенно возрастающей концентрацией. Измеряют оптическую плотность каждого из приготовленных растворов при l_max и строят график зависимости A = f (C) (рис.9).

Градуировочный график позволяет определить диапазон концентраций анализируемого вещества, при котором соблюдается линейная зависимость оптической плотности от концентрации (подчинение основному закону светопоглощения Бугера-Ламберта-Бера) и является необходимым при разработке методик определения количественного содержания лекарственных веществ.

и на основании полученных данных определяется среднее значение удельного показателя поглощения по формуле:

, где n - число фотометрируемых растворов.

Рис. 10. Градуировочный график

В фармацевтическом анализе также часто используют спектрофотометрию в УФ-области для следующих целей :

● определения количества действующего вещества, перешедшего в раствор через время, указанное в НД при растворении таблеток (тест «Растворение);

●при испытаниях на однородность дозирования определяют содержание действующего вещества в каждой отдельной дозе.

3.5. ОСОБЕННОСТИ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

В ВИДИМОЙ ОБЛАСТИ СПЕКТРА

В видимой области спектра электромагнитное излучение (360-780 нм) обычно поглощают окрашенные вещества: либо за счёт собственной окраски (например, рибофлавин), либо за счёт окрашенных продуктов реакции определяемых веществ с реагентами (функциональный анализ).