Флавоноиды (витамины гpуппы P)

Витамины группы P имеют различную химическую структуру. Они содержатся во многих растениях, главным образом в плодах шиповника, цитрусовых, незрелых грецких орехах, ягодах черной смородины, рябине, зеленых листьях чая, винограде, гречихе и др.

К группе витаминов P относится большое число веществ — флавоноидов, которые распространены в природе либо в свободном состоянии, либо в виде гликозидов. По химическому строению флавоноиды представляют собой производные флавана (2-фенилхpомана), содержащего в молекуле конденсированную систему хpоман (дигидpобензо-g-пиpан) и связанное с ним бензольное ядро (в положении 2):

Из индивидуальных веществ, обладающих P-витаминной активностью, применяют рутозид (рутин), кверцетин, дигидрокверцетин (табл. 52.6). По химической структуре рутин относится к гликозидам. Сахарная часть его молекулы — дисахарид — включает D-глюкозу и L-рамнозу. Агликоном является кверцетин, который применяют в виде индивидуального лекарственного вещества с P-витаминной активностью. Дигидрокверцетин также является агликоном.

Рутин содержится в листьях руты пахучей (Ruta graveolens L.), в почках и цветках софоры японской (Sophora japonica L.) и других растений. Наиболее богатым его источником служит зеленая масса гречихи, из которой выделяют 1,5–6% рутина. Извлекают рутин водой, затем отделяют белки осаждением, и рутин перекристаллизовывают. При получении следует учитывать, что рутин в кислой среде, особенно при нагревании, легко гидролизуется с образованием кверцетина, рамнозы и глюкозы.

Кверцетин получают из рутина путём гидролиза. Дигидрокверцетин получают из древесины лиственницы сибирской (Larix sibirica Zedeb.) и лиственницы Гмелина (Larix gmelini Rupr.) или лиственницы даурской (Larix dahurica Furcz.), сем. сосновых (Pinaceae).

52.6. Свойства флавоноидов

Лекарственное вещество	Химическая структура	Описание
Rutoside—рутозид (Рутин)	3-рутинозид кверцетина или 3-рамноглюкозил-3,5,7,3’,4’-пентаоксифлавон	Зеленовато-желтый мелкокристаллический порошок без запаха
Quercetin— кверцетин	3,5,7,3’,4’-пентаоксифлавон	Жёлтый мелкокристаллический порошок без запаха
Dihydroquercetin— дигидрокверцетин (Диквертин)	2,3-дигидро-3,5,7,3’,4’-пентаоксифлавон	Мелкокристаллический или аморфный порошок от светло-желтого до желтого с зеленоватым оттенком цвета без запаха. Т.пл. 220-222 ºС

Рутозид, кверцетин и дигидрокверцетин отличаются характерной зеленовато-желтой или желтой окраской кристаллов. Флавоноиды практически нерастворимы или очень мало растворимы (дигидрокверцетин) в воде и хлороформе, дигидрокверцетин растворим, кверцетин мало растворим в этаноле, а рутозид растворим в кипящем этаноле. Являясь многоатомными фенолами, они растворимы в разбавленных растворах едких щелочей.

Для испытания на подлинность флавоноидов используют ИК-, УФ-спектрофотометрию, ПМР-спектроскопию. ИК-спектры флавоноидов, полученные после прессования в таблетках бромида калия в области 4000-700 см^–1, должны полностью совпадать с полосами поглощения прилагаемых к НД рисунков спектров.

УФ-спектры поглощения растворов флавоноидов в этаноле в области 220-400 нм имеют максимумы поглощения у рутозида при 258 нм и 362,5 нм, у кверцетина — при 255 нм и 375 нм, а у дигидрокверцетина — минимум поглощения при 247 нм, максимум при 290 нм и плечо при 325 нм. В соответствии с требованиями ФС устанавливают величины удельных показателей поглощения этанольных растворов. У рутозида при длине волны 362,5 нм он находится в пределах от 300 до 330; у дигидрокверцетина — при длине волны 290 нм он должен быть 630±60.

Подлинность дигидрокверцетина можно подтвердить с помощью ПМР спектров. Раствор в D₄-метаноле должен иметь относительно тетраметилсилана химические сдвиги в виде дублетов 4,49; 4,90; 5,87; 5,91; 6,79; 6,84; 6,96 м.д., группу сигналов в области от 3,0 до 5,0 м.д., относящихся к растворителю, и должен соответствовать прилагаемому к ФС спектру ПМР. Подтверждением подлинности дигидрокверцетина служит также хроматограмма, полученная методом ВЭЖХ, на которой должен быть пик, сопоставимый с ГСО этого же вещества.

Для испытаний флавоноидов используют реакцию гидролиза (рутозид), а также химические реакции, обусловленные наличием в молекулах фенольных гидроксилов, образованием халконов, перилиевых солей, комплексных соединений.

Для испытания подлинности рутозида и кверцетина используют цветную реакцию с раствором гидроксида натрия (желто-оранжевое окрашивание). Окраска обусловлена превращением флавоноида в халкон с раскрытием пиранового цикла:

Цветная реакция происходит при действии на рутозид и кверцетин порошком магния и концентрированной хлороводородной кислотой в спиртовой среде (красное окрашивание). Это испытание известно под названием цианиновой реакции. Она основана на образовании окрашенных пирилиевых солей при восстановлении водородом флавоноидов, в том числе рутозида:

Для испытания на подлинность дигидрокверцетина (ФС) используют аналогичную реакцию, но вместо порошка магния берут гранулированный цинк; появляется малиновое окрашивание.

Наличие фенольных гидроксилов в молекуле рутозида и кверцетина легко установить цветной реакцией с хлоридом железа (III) (темно-зеленое окрашивание). При действии на спиртовый раствор рутозида 10% раствором молибдата аммония образуется комплексное соединение лимонно-желтого цвета с максимумом поглощения в области 380-390 нм.

Рутозид образует комплексные соединения с солями других тяжелых металлов, например с солями свинца (выпадает оранжевый осадок). Присутствие в его молекуле фенольного гидроксила обусловливает положительную реакцию с раствором формальдегида в серной кислоте (красно-оранжевое окрашивание) и реакцию образования азосоединения с солью диазония (красно-бурая окраска). Кверцетин образует азосоединение красно-оранжевого цвета. Окрашенные продукты получаются при взаимодействии рутозида и кверцетина с нитритом натрия в присутствии серной кислоты.

Подлинность рутозида подтверждают также путем кислотного гидролиза, который происходит в результате кипячения (с обратным холодильником) в присутствии серной кислоты. Образующийся кверцетин, перекристаллизованный из этанола, имеет температуру плавления 308 °C. Эту методику используют для гравиметрического определения рутозида.

Наличие глюкозы в молекуле рутозида обнаруживают после гидролиза в кислой среде с помощью реактива Фелинга.

При испытании на чистоту устанавливают наличие в рутозиде примеси кверцетина (не более 5%). Для этой цели используют УФ-спектрофотометрию или радиальную бумажную хроматографию. Хроматографируют в чашке Петри в 60%-ном растворе уксусной кислоты. После опрыскивания 10%-ным раствором сульфата аммония хроматограммы сушат и просматривают в УФ-свете при 360 нм. Должно быть только одно пятно кверцетина. Устанавливают также отсутствие в рутозиде примеси алкалоидов, хлорофилла и пигментов, растворимых в эфире, а также других примесей, нерастворимых в этаноле. Они могут попасть в него из исходного растительного сырья.

В кверцетине устанавливают наличие примеси посторонних флавоноидов методом ТСХ на пластинках Силуфол или Сорбфил в системе растворителей хлороформ-метанол-вода (52:28:6). В УФ-свете при длинах волн 254 и 366 нм на хроматограмме должно просматриваться одно пятно с R_f 0,6±0,1. Родственные примеси (кверцетина, дигидрокемпферола, нарингенина) в дигидрокверцетине определяют методом ВЭЖХ с помощью жидкостного хроматографа с УФ-детектором и колонкой с обращенно-фазным сорбентом в условиях, предусмотренных ФС. Их общее содержание не должно превышать 10%. Этот же метод используют для количественного определения дигидрокверцетина (не менее 90%). Содержание рассчитывают по площадям пиков испытуемого вещества и ГСО.

Количественное определение рутозида и кверцетина выполняют методом УФ-спектрофотометрии. Растворителем служит абсолютный этанол для рутозида и смесь этанола, хлороводородной кислоты и воды (2:1:47) для кверцетина. Измерения оптической плотности растворов рутозида выполняют при 375 и 362,5 нм, а затем рассчитывают содержание по приведенным в ФС формулам. Содержание кверцетина вычисляют по величине оптической плотности ГСО. Известны также различные способы фотометрического определения рутозида и кверцетина с использованием рассмотренных выше цветных реакций.

Рутозид, кверцетин и дигидрокверцетин хранят в хорошо укупоренной таре, в сухом месте, предохраняя от действия света.

Они относятся к группе капилляроукрепляющих средств. Применяют внутрь для профилактики и лечения гипо- и авитаминоза P, а также для лечения заболеваний, связанных с нарушением проницаемости сосудов и поражений капилляров. Назначают рутозид внутрь в виде таблеток по 0,02–0,05 г 2–3 раза в сутки. Аналогично рутозиду, но в несколько меньших дозах (по 0,02 г) назначают кверцетин и дигидрокверцетин.

ГЛАВА 53.

ПРОИЗВОДНЫЕ ТИОФЕНА

В 80-90-х годах XX века было синтезировано большое число соединений, содержащих в молекуле частично или полностью гидрированный пиридин, его конденсированную систему с тиофеном (тиенопиридин), а также ароматический компонент (о-хлорфенил, остаток тирозина или аланина). Эти соединения проявляют антиагрегантные свойства.

Одним из таких лекарственных веществ является соединение, включающее гетероциклы тиофен и пиридин, производное тетрагидротиенопиридина — тиклопидина гидрохлорид (табл. 53.1).

53.1. Свойства тиклопидина гидрохлорида

Лекарственное вещество	Химическая структура	Описание
Ticlopidine Нydrochloride— тиклопидина гидрохлорид (Тиклид)	5-[(2-хлорфенил)метил]-4,5,6,7-тетрагидротиено[3,2c]пиридин	Белое кристаллическое вещество

Тиклопидина гидрохлорид легко растворим в воде и метаноле, умеренно растворим в этаноле и метиленхлориде, трудно растворим в ацетоне.

Подлинность тиклопидина гидрохлорида устанавливают методом УФ-спектрофотометрии. Испытуемый раствор в области 250-350 нм имеет два максимума поглощения при 268 и 275 нм.

Для испытания подлинности используют также цветную реакцию с 2% раствором лимонной кислоты в уксусном ангидриде. При нагревании смеси на водяной бане до 80 °C появляется красное окрашивание. Подтвердить подлинность можно также методом ВЭЖХ (при проведении количественного определения). Время удерживания пика испытуемого и стандартного растворов должно быть идентичным.

Посторонние примеси определяют методом ТСХ (не более 0,4%), а остаточные количества растворителей (метиленхлорида и изопропилового спирта) — методом ГЖХ.

Метод ВЭЖХ используют для обнаружения примесей, в т.ч. N-(2-хлорбензил)-2-(2-тиенил)этиламин гидрохлорида (не более 0,2%). Подвижной фазой служит смесь метанол-0,005М раствор гидрофосфата калия (70:30). Этот же метод используют для количественного определения тиклопидина гидрохлорида в таблетках с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и фосфатного буферного раствора (60:40).

Количественное определение тиклопидина гидрохлорида выполняют также методом неводного титрования, а в таблетках — спектрофотометрическим методом при 232 нм (перегиб в УФ-спектре), используя растворитель 0,01М раствор хлороводородной кислоты.

Хранят тиклопидина гидрохлорид по списку Б в прохладном, сухом, защищенном от света и влаги месте, при температуре до 25 °C.

Тиклопидина гидрохлорид проявляет избирательное антитромботическое действие. Применяют для профилактики тромбозов, в т.ч. после инфарктов, при тяжелом атеросклерозе и ишемических заболеваниях внутрь в таблетках по 0,25 г. Снижает риск повторных инфарктов и инсультов.

ГЛАВА 54.

ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРРОЛИДИНА

Производные 2-пирролидона

Пиррол — пятичленный гетероцикл с одним гетероатомом азота, пирролидин — гидрированный пиррол. Применяемые в медицине производные пиррола представляют собой соединения пирролидина и 2-оксопирролидина (2-пирролидона):

В результате поиска структурных аналогов g-аминомасляной кислоты (ГАМК), обладающих психотропным действием, получен пирацетам (ноотропил). Он представляет собой циклический аналог ГАМК — 2–(2-оксо-1-пирролидинил)ацетамид:

Исходным продуктом синтеза пирацетама является a-пирролидон. Поскольку он с трудом алкилируется по атому азота, синтез осуществляют через его лактимный эфир:

Пирацетам является родоначальником новой группы психотропных лекарственных веществ, названных «ноотропами».

54.1. Свойства пирацетама

Лекарственное вещество	Химическая структура	Описание
Piracetam— пирацетам (Ноотропил)	2-(2-оксо-1-пирролидинил)ацетамид	Белый кристаллический порошок без запаха. Т.пл. 151–155 °C

Пирацетам (табл. 54.1) легко растворим в воде, растворим в этаноле, мало растворим в хлороформе, практически нерастворим в эфире.

Подлинность пирацетама устанавливают с помощью ИК-спектра, снятого после прессования в таблетках с калия бромидом в области 4000-400 см^–1, по полному совпадению полос поглощения с прилагаемым к ФС рисунком спектра. Кроме того, подлинность подтверждают по отсутствию выраженных максимумов поглощения в УФ-спектре 1%-ного водного раствора в интервале 230-350 нм.

При нагревании пирацетама с раствором гидроксида натрия выделяется аммиак, который обнаруживают по запаху и посинению красной лакмусовой бумаги. Эта же химическая реакция лежит в основе количественного определения пирацетама по методу Кьельдаля (см. ч. I, гл. 6).

Посторонние примеси (не более 0,5%) определяют методом ТСХ на пластинке со слоем силикагеля вместе со свидетелем (растворы в метаноле). Хроматографируют восходящим методом в камере со смесью растворителей хлороформ-метанол-раствор аммиака концентрированный (70:30:3). Проявляют в камере для хлорирования смесью 1,5%-ного раствора перманганата калия и хлороводородной кислоты концентрированной (1:1). При испытании на чистоту определяют также прозрачность, цветность, pH раствора, сульфатную золу, тяжелые металлы и микробиологическую чистоту (методом прямого посева).

Для идентификации и фотометрического определения пирацетама в лекарственных формах используют цветную реакцию, основанную на образовании индофенола. Методика состоит в последовательной обработке пирацетама гипохлоритом натрия и фенолом с последующим фотометрированием окрашенного раствора при 630 нм.

Хранят по списку Б в сухом, защищенном от света месте.

Применяют пирацетам как психотропное (ноотропное) средство при заболеваниях нервной системы, особенно связанных с нарушением обменных процессов мозга и с сосудистыми заболеваниями. Назначают в таблетках (капсулах) по 0,4-0,8 г или 20%-ные растворы в ампулах для инъекций.

Производные пролина

В 80-х годах XX века были созданы синтетические ингибиторы ангиотензинконвертирующего фермента, обладающие антигипертензивным действием. Наиболее широкое применение из них сразу же получили производные пирролидина: каптоприл и эналаприл.

Основой химической структуры каптоприла и эналаприла является производное аминокислоты пролина — 2-метилпропионил-L-пролин:

Каптоприл — первый синтетический серусодержащий ингибитор ангиотензинконвертирующего фермента, основной представитель этой группы. Эналаприл отличается от каптоприла более сложной химической структурой и отсутствием в молекуле меркаптогруппы (табл. 52.2). Он является «пролекарством», т.к. в организме гидролизуется до каптоприла, ингибирующего ангиотензинконвертирующий фермент.

Исходными продуктами синтеза каптоприла являются тиоуксусная и метакриловая кислоты. Они образуют тиоэфир, который превращают в хлорангидрид, или ацилируют пролин и полученное N-ацилпроизводное гидролизуют:

54.2. Свойства производных пролина

Лекарственное вещество	Химическая структура	Описание
Captopril— каптоприл (Капотен)	1-[(2S)-3-меркапто-2-метилпропионил]-L-пролин	Белый кристаллический порошок с характерным запахом
Enalapril Maleate— эналаприла малеат	1-[N-[S]-1-карбокси-3-фенилпропил]-L-аланил-L-пролин-1’-этилового эфира малеат	Белый кристаллический порошок

Производные пролина представляют собой белые кристаллические вещества (табл. 54.2). Каптоприл легко растворим в воде, этаноле, метаноле, хлороформе. Эналаприл умеренно растворим в воде, растворим в этаноле, метаноле, диметилформамиде.

Фармакопея США рекомендует для испытания их подлинности использовать ИК-спектры, которые должны соответствовать спектрам стандартных образцов.

Каптоприл и эналаприл идентифицируют методом ВЭЖХ по временам удерживания основных пиков. Каптоприл идентифицируют также методом ТСХ на пластинках Силуфол или Сорбфил УФ-254 параллельно со свидетелем в системе толуол-ледяная уксусная кислота (3:1). Методом ВЭЖХ определяют примесь каптоприла дисульфида (по параметрам пиков примеси и испытуемого вещества).

Каптоприл можно количественно определить иодатометрическим методом. Точную навеску (около 0,3 г) растворяют в 100 мл воды в колбе с притертой пробкой, добавляют 10 мл 3,6 М серной кислоты и 1,0 г иодида калия, 2 мл раствора крахмала. Титруют 0,1 М раствором иодата калия до появления голубой окраски, не исчезающей в течение 30 сек. Определение основано на окислении сульфгидрильной группы иодом:

KIO₃ + 5KI + 3H₂SO₄ ¾® 3I₂ + 3K₂SO₄ + 3H₂O

2R-SH + I₂ ¾® R-S-S-R + 2HI

Количественное определение каптоприла в таблетках выполняют методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 212 нм (растворитель — 0,1М раствор хлороводородной кислоты). Эналаприла малеат в таблетках определяют методом ВЭЖХ.

Хранят каптоприл и эналаприл по списку Б, в сухом, защищенном от света месте, в плотно укупоренной таре; каптоприл — при температуре не выше 30 °C.

Каптоприл и эналаприл обладают гипотензивным действием. Их назначают при различных формах гипертонической болезни и сердечной недостаточности внутрь в таблетках — каптоприл по 0,025; 0,05 и 0,1 г; эналаприл — по 0,005; 0,01 и 0,02 г.